2) Utilice una endonucleasa de restricción para cortar el genoma en varios fragmentos y utilice la misma endonucleasa de restricción para cortar uno en la muesca del plásmido de E. coli para introducirlo. cada fragmento de ADN en el plásmido.
3) Introducir el plásmido en E. coli, recubrirlo y cultivarlo en una placa que contenga sustrato A para expresar el gen del plásmido. Si algunas colonias son marrones, significa que hay un gen de hidrolasa en la colonia.
2. La principal herramienta para la evolución de los virus es la mutación genética. La mutación genética es la causa fundamental de la mutación del virus. La mutación también es una forma importante para que los virus se adapten al medio ambiente y sobrevivan. La mutación es la base de la evolución genética. Como grupo biológico independiente, la evolución de los virus debe ajustarse a la teoría de la selección natural de Darwin. Para sobrevivir y adaptarse mejor al medio ambiente, los virus deben mutar en diversidad. La mutación y evolución de los virus tienen características diferentes a las de la vida celular ordinaria. Por ejemplo, su velocidad es mucho más rápida que la de la vida normal. La investigación del virus del SARS predice que la edad aproximada del coronavirus del SARS es de 230 años, con un rango de aproximadamente 195 a 265 años, que es casi 10.000 veces la tasa de evolución de la vida multicelular. Por tanto, la mutación y evolución viral siempre han sido una parte importante de la virología.
Las principales formas en que los virus evolucionan y mutan son:
1. Características generales de las mutaciones genéticas virales: los virus se replican cientos de millones cada día y la ARN transcriptasa del virus no tiene función correctora. La tasa de coincidencia oscila entre 1/100.000 y 1/100.000, que es mucho más alta que la de las células huésped. Dado que el virus polimerasa del ADN (ácido desoxirribonucleico) tiene una función de corrección de errores, su tasa de mutación es mucho menor que la de los virus de ARN, pero también mucho mayor que la de las células huésped. Sin embargo, la replicación del virus de la hepatitis B (VHB) se produce mediante la transcripción inversa del ARN pregenómico intermedio en ADN de cadena negativa. La transcripción inversa se realiza utilizando la propia ADN polimerasa del virus, que carece de función de corrección y es difícil de corregir después de mutaciones, lo que resulta en una distorsión de la transcripción inversa durante el proceso de replicación. Por tanto, su mutación es 4 órdenes de magnitud mayor que la de otros virus de ADN y de 1 a 2 órdenes de magnitud menor que la de los virus de ARN. La replicación de alta velocidad y la alta tasa de mutación aumentan la diversidad genética del virus y proporcionan las primeras condiciones para su evolución mutacional. Las mutaciones puntuales suelen producirse en el tercer nucleótido de un codón y, en su mayoría, son mutaciones no fenotípicas. Las mutaciones en el primer y segundo nucleótido de un codón pueden provocar cambios en los aminoácidos causados por mutaciones en los nucleótidos en posiciones críticas. Replicación viral y expresión de proteínas virales. Si los nucleótidos aquí participan en marcos de lectura abiertos superpuestos, entonces una mutación en un solo sitio puede alterar ambos marcos de lectura abiertos. La mutación puede conducir a la sustitución de aminoácidos en posiciones clave del sitio antigénico, lo que da como resultado una nueva conformación de la proteína y una nueva antigenicidad. Hay varias formas de mutación, incluida la conversión de nucleótidos, la transversión, la inserción, la deleción, la recombinación intramolecular, la recombinación entre fragmentos de ácidos nucleicos, la integración de genes virales y genes del huésped, etc. Las interacciones entre virus y ácidos nucleicos del huésped pueden expandir rápidamente la diversidad de ácidos nucleicos virales. Por ejemplo, los oncogenes virales (oncogenes vn) existen en los ácidos nucleicos del huésped; se han encontrado inserciones de ubiquitina del huésped y otros componentes de ácidos nucleicos en los genomas de los flavivirus, etc.
2. Mutación genética y evolución entre huéspedes
En términos generales, a excepción de algunos de los llamados virus nuevos que han mutado en sus propios huéspedes, la mayoría de ellos se deben a la resultante. por cambios en el anfitrión. En un mismo grupo de huéspedes, para que el virus y el huésped se desarrollen armoniosamente, la toxicidad del virus tenderá a ser moderada. Por lo tanto, la mayoría de los virus mortales, como el SARS y la influenza aviar, se originan a partir de mutaciones y evolución que cambian los genes del huésped. Debido a los cambios en los huéspedes, la transmisión de virus entre especies entre huéspedes es cada vez más grave. El SARS, la gripe aviar, el VIH-1 y el VIH-2 evolucionaron a partir de virus no humanos. El SARS fue causado por personas en Guangdong que comían gatos de algalia y pavos reales azules, y la gripe aviar fue causada por humanos que se alimentaban y entraban en contacto con aves de corral durante mucho tiempo. El VIH-1 se transmite de los chimpancés a los humanos a través de la barrera entre especies, y el VIH-2 se transmite cuando los humanos comen cejas blancas.
Aunque las mutaciones simples permiten que el virus evite ser eliminado por el sistema inmunológico del huésped, la rápida mutación del virus también limita su tamaño. Generalmente, la tasa de mutación de los virus de ARN es uno o dos órdenes de magnitud más rápida que la de los virus de ADN, por lo que el tamaño máximo de los virus de ARN también es un orden de magnitud menor que el del ADN, lo que limita la evolución y función de los virus.
3. Transmisión horizontal del material genético y evolución del virus.
También se produce un intercambio de material genético entre el virus y el huésped. Una vez que un virus ingresa a una célula, también lo hace el mismo virus.
El intercambio genético entre ellos no sólo puede "intercambiar experiencias", sino también "rastrear hasta la fuente", intercambiando así genes útiles perdidos durante el proceso de mutación.
Foro de Virología, Foro Académico Gratuito, Virología, Comunicación, Virus, Virología, Células, Inmunidad y Cultivo Los virus pueden intercambiar información genética mediante la recombinación o reasociación de segmentos del genoma, que es lo que hacen los virus en Necesario para continuar supervivencia a través del proceso de selección natural. La infección simultánea de células huésped por dos o más virus brinda la oportunidad de intercambiar información genética entre virus. Además, también existe un intercambio de información genética entre los genomas virales y celulares, como lo demuestra mejor la presencia de secuencias altamente homólogas en muchos genomas virales. Este intercambio de información genética juega un papel importante en la evolución viral.
3. Posibilidad: Debido a 1) la resolución limitada de la electroforesis en gel de agarosa, diferentes fragmentos de ácido nucleico con pesos moleculares similares pueden estar en la misma banda; 2) posibilidad: porque la conformación molecular del ADN puede ser diferente; diferente. Hicimos un experimento y descubrimos que la reacción de digestión enzimática del ADN plasmídico es la más rápida. Debido a que es altamente helicoidal, la resistencia al movimiento es pequeña. Es concebible que si hay suficientes ADN pequeños,