1 Instrumentos y reactivos Cromatógrafo líquido de alto rendimiento HP 1100; sustancia de referencia α-asarona (Instituto de China para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos, número de lote: 10298-0001); Sigema Company); materia prima de α-asarona (Hubei Tianmen Tianyi Pharmaceutical Co., Ltd., número de lote; 20040501, 20040502, 20040601, asarona para inyección (Wuhan Haite Biopharmaceutical Co., Ltd., especificación: 8 mg, número de lote); : 20040501, 20040502, 20040601); inyección de Asarum (Hubei Tianyao Pharmaceutical Co., Ltd., especificación: 2 ml; 8 mg, número de lote: 20041010, 20041011, 20041065438); metanol (pureza cromatográfica, CAS 67-56-1 TEDIA Company); , ING EE.UU.).
2 Métodos y resultados
2.1 Condiciones cromatográficas
Columna cromatográfica: columna Diamonsil C18 (200 mm×4,6 mm, 5 WM; fase móvil: metanol-); agua (70:30); el caudal es de 1,0 ml min-1; longitud de onda de detección: 258 nm; temperatura de la columna: 25°C;
2.2 Relación lineal y volumen mínimo de detección
Pesar con precisión 25 mg de sustancia de referencia α-asarona, colocarlo en un matraz aforado de 100 ml, añadir fase móvil para disolver y diluir hasta el marcar y agitar bien. Mida con precisión 2,0 ml, 4,0 ml, 6,0 ml, 8,0 ml y 10,0 ml en un matraz volumétrico de 25 ml, disuelva y diluya hasta la marca con la fase móvil, agite bien y realice el análisis cromatográfico. El área del pico A y la concentración C (μg·mL-1) mostraron regresión lineal, C = 1,38× 10-5a+0,45, r=0,9998. Los resultados experimentales muestran que cuando la concentración de α-asarona es de 20 ~ 100 μ. En las condiciones cromatográficas de este artículo, cuando la relación señal-ruido es 3:1, la cantidad mínima de detección es 0,48 ng.
2.3 Prueba de tasa de recuperación
Pese con precisión 5 muestras de materia prima del mismo lote con contenido conocido, agregue 5 mg de sustancia de referencia α-asarona respectivamente y proceda de acuerdo con el método de la muestra. determinación. Medir y calcular la tasa de regresión. Los resultados se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1 Prueba de recuperación de muestra
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Mida la RSD de recuperación promedio para la cantidad agregada a la muestra.
(mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)
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5.07 5.02 10.11 100.32
5.05 5.02 10.05 99.56
5.02 5.02 10.01 99.40 99.81 0.43
5.03 5.02 10,04 99,82
5,01 5,02 10,03 100,12
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2.4 Prueba de precisión
Tomar una solución de control con una concentración de 50,2 μg·mL-1, un volumen de muestra de 20 μl y repetir la medición 5 veces. El área del pico cromatográfico promedio de α-asarona fue 65438 ± 0027 y la desviación estándar relativa fue del 0,6% (n = 5).
2.5 Prueba de estabilidad
La solución de referencia con una concentración de 50,2 μg·mL-1 se inyectó a las 1, 2, 4, 6 y 8 horas respectivamente, con un volumen de inyección de 20 µl. La RSD del área del pico es del 1,0 %, lo que indica que la solución de α-asarona es estable en 8 horas.
2.6 Repetibilidad
Según el método de medición de la muestra, tomar 5 muestras del mismo número de lote y medir el contenido RSD = 0,4% (n = 5).
2.7 Medición de la muestra
Pese (o mida) con precisión una cantidad adecuada (aproximadamente equivalente a 25 mg de α-asarona), colóquela en un matraz volumétrico de 100 ml y agregue una cantidad adecuada de fase móvil agitar bien para disolver y diluir hasta la marca, agitar bien, medir con precisión 5 ml, colocarlo en un matraz aforado de 25 ml, agregar fase móvil hasta la marca, agitar bien y tomar aproximadamente 25 ml de la solución de prueba; mg de α-asarona, colocarlo en un matraz aforado de 100 ml, agregar fase móvil para disolver y diluir hasta la marca, agitar bien, medir con precisión 5 ml, colocarlo en un matraz aforado de 25 ml, agregar fase móvil hasta la marca, agitar así como una solución de control. De acuerdo con las condiciones cromatográficas anteriores, el volumen de la muestra fue de 20 μl y el contenido se calculó utilizando el método estándar externo, consulte la Tabla 2. El cromatograma se muestra en la Figura 1.
Tabla 2 Resultados de la medición del contenido de muestra (cantidad de la etiqueta de preparación)
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Número de lote de la forma farmacéutica del fabricante. Este método es el método UV.
(%) (%)
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Hubei Tianmen Tianyi
Pharmaceutical Co., Ltd. Materia prima de α-asarona 20040501 100,2 101,4
20040502 99,9 101,1
20040601 100,3 101,6
Wuhan Haite Biotech
Pharmaceutical Co., Ltd. Alfa-asarona inyectable 20040906100.6101.2
20040908 98,8 100,3
20040910 99,8 101,2
p>Farmacia Hubei Tianyao
Inyección de α-Asarone de sociedad anónima 20041010 99,5 99,9
20041011 99,1 99,5
20041012 99,2 99,1
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A.α-Asarone sustancia de referencia b. c. Control en blanco Figura 1 Cromatograma de HPLC
3 Discusión
3.1 Estándares nacionales de medicamentos
Se han mejorado los estándares químicos locales. La α-asarona en el Volumen 5 del Estándar Nacional se determina mediante el método ultravioleta. Las materias primas y los preparados se midieron a longitudes de onda de 258 nm y 313 nm, respectivamente. La longitud de onda de este método no es uniforme y aquí también se absorbe β-asarona. Este método tiene poca especificidad. Medidos con este método, los resultados de la medición son precisos.
3.2 Selección de la longitud de onda de medición
La α-Asarona se disuelve en la fase móvil. Para determinar la longitud de onda de detección adecuada, escanee a 200 ~ 400 nm. Dentro de este rango, la α-asarona tiene dos longitudes de onda de absorción máxima, 258 nm y 313 nm. Al detectar muestras, 258 nm es más sensible a la detección de impurezas, por lo que se selecciona 258 nm como longitud de onda de detección.
3.3 Selección de la fase móvil
La selección de la fase móvil es principalmente una comparación de metanol y acetonitrilo. Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3 Selección de relación de fase móvil
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20:80 60:40 70:30 80:20
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El metanol-agua no mostró un pico a los 18 minutos en 25 minutos, pero aparecieron picos a los 12 minutos y a los 5 minutos.
Pico α β resolución α β resolución α β resolución α β no se puede separar.
Es mejor conducir.
El agua con acetonitrilo alcanzó su punto máximo a los 25 minutos y 22 minutos. 14 minutos con un máximo de 5 minutos.
Pico α β resolución α β resolución α β resolución α β no se puede separar.
Es mejor conducir.
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Como se puede observar en los resultados anteriores, 70 :30 La proporción es mejor, el momento del pico es más temprano y el pico de β-asarona está bien separado del pico principal. En términos de valor económico, el metanol es más barato que el acetonitrilo, por lo que la fase móvil es metanol-agua (70:30).
3.4 Separación de las principales impurezas
Las principales impurezas de la α-asarona son β-asarona, 2,4,5-trimetoxibenceno y 2,4,5-trimetoxibenceno La propiofenona se puede separar bien en este sistema y las sustancias relacionadas también se pueden separar bien.