Categoría: Ciencia e Ingeniería
Análisis:
Métodos de detección rápida in situ y detección en laboratorio de rodamina B (rosa roja) en alimentos
Métodos de detección rápida in situ y de laboratorio de rodamina B (rosa roja) en alimentos
(Instituto de Inspección y Supervisión de Calidad de Productos de Dalian)
1. Definición
La rodamina B es un tinte sintético con color rosa brillante, nombre en inglés: Rodamina B; fórmula molecular C28H31ClN2O3; peso molecular 479.0175; fluorescencia y se utiliza como tinte fluorescente para células en laboratorios, vidrios coloreados, fuegos artificiales especiales y petardos y otras industrias. No se permite teñir alimentos.
2. Principio de detección
La rodamina B es liposoluble y se utiliza como colorante para condimentos (principalmente chile en polvo y aceite de chile). Se producirán residuos al utilizar condimentos contaminados en preparaciones de alimentos. Cuando los condimentos se tiñen con rodamina B, el contenido es mayor o incluso se incorpora directamente, lo que permite realizar pruebas in situ. Debido a su bajo contenido, los alimentos deben enviarse a un laboratorio para su análisis. Durante las pruebas in situ, utilice disolventes orgánicos no polares (como n-hexano, n-hexano, acetona, etc.) para disolverlo y extraerlo. El extracto fluye a través de un cartucho de extracción en fase sólida de alúmina neutra para adsorber la rodamina B. , y utiliza disolventes orgánicos no polares (por ejemplo, n-hexano) para eluir la grasa de la muestra y las sustancias endógenas que interfieren con los alimentos. Se puede observar una banda rosa brillante en la pequeña columna a simple vista. Se determina que es una muestra sospechosa y la muestra debe enviarse al laboratorio para realizar más pruebas de confirmación. Los métodos de prueba de laboratorio todavía utilizan disolventes orgánicos no polares (como n-hexano, n-hexano, acetona, etc.) para disolver y extraer la rodamina B de los alimentos. El extracto fluye a través de un cartucho de extracción en fase sólida de alúmina neutra para adsorber la rodamina. B., utilizar un disolvente orgánico no polar (como n-hexano) para eluir la grasa de la muestra y las sustancias endógenas que interfieren con los alimentos, luego utilizar un disolvente orgánico polar (como el metanol) para eluir y recoger la rodamina B de la columna, y Utilice cromatografía líquida de alta eficiencia de fase inversa-detector de luz visible/UV para una detección cualitativa y cuantitativa.
3. Reactivos y materiales
3.1 Utilizar alúmina neutra (malla 100) para cromatografía. Hornear a 105°C durante 2 horas antes de su uso. Retirar del desecador y enfriar a temperatura ambiente. botella y colóquela herméticamente.
3,2 n-Hexano (grado analítico);
Acetona (grado analítico);
Metanol (grado cromatográfico); 20 Solución de acetona-n-hexano: Tome 100 ml de acetona y agregue 400 ml de n-hexano y mézclelo como solución de extracción y solución de purificación de rodamina B.
3.4 Cartucho de extracción de alúmina en fase sólida: Tome un tubo de jeringa de plástico de 5 ml, introduzca un pequeño trozo de algodón absorbente en el puerto inferior, llénelo con alúmina procesada de unos 3 cm de altura y déjelo a un lado para más adelante. usar.
3.5 Solución estándar de Rodamina B: Pesar 5,0 mg de Rodamina B (Reactivo Analítico Puro Shenyang Reagent Factory No. 3), disolverlo con acetona 20 en n-hexano (3.3) y diluir a 50 ml, y Prepare una solución madre estándar con un contenido de 100 ug/ml. Tome 0, 0,25, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 ml de esta solución, dilúyala con acetona 20 en solución de n-hexano (3.3) y ajuste el volumen a 50 ml, y realice una concentración de 0,0, 0,5, 1,0, 2,0. , 4,0, 8,0 ug/ ml de solución de serie estándar.
3.6 Cristalería
4. Método de detección rápida in situ
4.1 Chile en polvo: Ponga una cucharada pequeña (aproximadamente 5 g) de chile en polvo en un vaso de precipitados pequeño, agregue aproximadamente 40 ml de n-hexano (3.3) que contenga 20 acetona, agite o revuelva durante 2 minutos, y dejar reposar.
Tome una funda de jeringa de plástico de 5 ml, inserte un pequeño trozo de algodón absorbente en el puerto inferior y vierta la alúmina preprocesada (elemento 3.1) en el tubo de la jeringa de aproximadamente 3 cm de altura para hacer una columna de extracción de alúmina en fase sólida. Espere hasta. está encima del vaso de muestra. Después de la clarificación, viértalo lentamente en la columna pequeña, conecte un vaso de líquido residual en el extremo inferior y vierta de 2 a 5 ml según el color. Tenga cuidado de no verter demasiado y asegúrese de que el color. La parte media e inferior de la columna pequeña todavía es blanca. En este momento, contiene rodamina. La muestra B tendrá una franja fluorescente de color rosa brillante en la parte superior de la columna, con bordes claros. El color rosa se intensificará y se ampliará a medida que avanza. El contenido aumenta. El extracto de muestra que no contiene rodamina B no tendrá una franja rosada, solo aparecerá una banda ancha con una interfaz amarilla-roja poco clara y luego vierta lentamente 20 ml de n-hexano (3.3) que contenga 20 acetona en el. columna pequeña. La banda rosada no se moverá hacia abajo, pero será más clara, y las bandas amarillas-rojas restantes se moverán hacia abajo. Si se eluye la mayor parte de la muestra, se puede considerar que es una muestra sospechosa que contiene rodamina B.
4.2 Aceite de chile Tome una cucharada pequeña de aceite de chile (aproximadamente 2 g) y póngala en un vaso de precipitados pequeño. Agregue aproximadamente 10 ml de n-hexano (3.2) y mezcle bien. Siga las instrucciones del punto 4.1 "Tome una funda de jeringa de plástico de 5 ml y... podrá juzgar que es una muestra sospechosa que contiene rodamina B".
4.3 Juicio Las muestras sospechosas que inicialmente se consideran que contienen rodamina B deben enviarse al laboratorio para realizar pruebas de confirmación por cromatografía líquida.
5． Métodos de ensayo de laboratorio
5.1. Instrumento
Cromatógrafo líquido de alta resolución (doble bomba, detector de luz UV/visible)
Columna cromatográfica C18 4,6mm X 15cm (5μm)
5.2. Extracción y purificación
5.2.1 Chile en polvo: Tomar 1 g de chile en polvo, agregar 20 ml de n-hexano (3.3) que contenga 20 acetona, agitar durante 10 minutos, dejar reposar o filtrar para separar el sobrenadante y el residuo. Agregar 10 ml de n-hexano (3.3) que contiene 20 acetona y repetir la extracción una vez, combinar las dos extracciones, mezclar bien y añadir el sobrenadante al cartucho de alúmina (3.4) con un gotero [el cartucho está precargado con 5 ml de solución de extracción (3.3), determine la cantidad de la columna de acuerdo con la profundidad del color y asegúrese de que las partes media e inferior de la columna pequeña después de cargar la muestra todavía estén blancas. El extracto de muestra que contiene rodamina B tendrá un brillo. tira fluorescente rosa en la parte superior de la columna, y el color será rosado Las bandas se profundizan y se ensanchan a medida que aumenta el contenido. El extracto de muestra sin rodamina B no tendrá una banda rosa, sino solo una banda ancha poco clara de color amarillo-rojo. Utilice n-hexano que contenga 20 acetona (3.3). Después de lavar la columna, la banda rosada no se mueve hacia abajo, pero es más clara. El resto de la banda amarilla-roja se mueve hacia abajo y se puede considerar como una elución. muestra sospechosa que contiene rodamina B. El efluente de la columna a lavar es incoloro, deje caer 5-10 ml de metanol, lave la cinta de rodamina B y recójala. Después de diluir el volumen con metanol, inyéctelo en un líquido de alto rendimiento. cromatógrafo para confirmación.
5.2.2. Aceite de chile: Pese 1 g de aceite de chile, agregue 10 ml de n-hexano (3.3) que contenga 20 acetona, mezcle uniformemente y colóquelo en la columna de alúmina (3.4). Agregue el sobrenadante con un gotero de acuerdo con "5.2.1" Alúmina. cartucho...inyectar en un cromatógrafo líquido de alto rendimiento para confirmación" y continuar.
5.2.3 Otros alimentos: Para los alimentos que utilizan aceite de pimiento rojo (en polvo) como condimento (como productos de soja con aceite rojo, pescado seco con aceite rojo, etc.), pese entre 10 y 20 g y utilice 20. acetona, lavar el aceite rojo (polvo) con alcano (3.3), o agitar la muestra y el eluyente en un homogeneizado para disolver y extraer la rodamina B. Dejar reposar la muestra líquida o centrifugar, separar la fase orgánica y añadir una solución adecuada. cantidad según la cantidad de agua Deshidratar con sulfato de sodio anhidro, y operar según el punto 5.2.1 "Utilizar un gotero para agregar el sobrenadante a la columna de alúmina...inyectarlo en un cromatógrafo líquido de alta resolución para confirmación". Para muestras con bajo contenido, la banda rosa es demasiado estrecha y el color es claro y no se puede ver claramente a simple vista. Aún puede usar el método anterior y lavar más la columna con 20 acetona y n-hexano (3.3) hasta. el efluente es incoloro y luego agregue 5. Use 10 ml de metanol para lavar la cinta de rodamina B y recójala. Después de concentrarla, inyéctela en un cromatógrafo líquido de alto rendimiento para realizar pruebas de confirmación.
5.3 Condiciones de cromatografía líquida
5.3.1 Columna cromatográfica: C18 4,6 mm Solución acuosa de metanol 1 ml/min
5.3.3 Detector: Luz ultravioleta/visible ( UV/VIS) detector; longitud de onda: 550 nm
5.3.4 Cualitativo y cuantitativo: solución estándar de rodamina B Tiempo de retención cualitativo, método estándar externo cuantitativo.
5.4 Cálculo del resultado
Y = C×V/M
Y——Contenido de rodamina B en la muestra (mg/kg)
C——La concentración de rodamina B encontrada en la curva estándar (ug/ml)
V——El volumen constante total de la muestra de prueba (ml)
M — —Pesaje de cantidad de muestra (g)
5.5 Notas: ① El rendimiento de la columna C18 es diferente y la concentración de la fase móvil debe ajustarse ligeramente. ② Bajo las condiciones de separación dadas por este método, la matriz de la muestra no tiene picos de interferencia cerca de la rodamina B. Muchos otros colorantes azoicos rojos pueden emitir picos después de la rodamina B. Preste atención a ajustar la separación entre estos picos de interferencia y la rodamina B. Interferencia Los ingredientes son: Sudán Naranja G, Sudán Rojo, Sudán Rojo 7B, Sudán Rojo I, Sudán Rojo II, Sudán Rojo III y Sudán Rojo IV.