La función de un tampón es resistir los cambios de pH cuando se añade una pequeña cantidad de ácido o álcali y agua, manteniendo un valor de pH relativamente estable. La explicación es la siguiente:
1. La solución tampón se refiere a una solución mixta compuesta de ácido débil y su sal, base débil y su sal, que puede compensar y reducir el impacto del ácido fuerte externo o de la base fuerte. hasta cierto punto, la influencia del valor de pH de la solución, manteniendo así el valor de pH de la solución relativamente estable. Hay tres sistemas principales de tampón de pH en los organismos: sistemas tampón de proteínas y bicarbonato.
2. Los tampones también se utilizan ampliamente en bioquímica, biología molecular, productos farmacéuticos y otros campos, y se utilizan a menudo para mantener el pH de sistemas experimentales. Esto se debe a que los cambios en el valor del pH del sistema de solución utilizado en el trabajo de investigación a menudo afectan directamente la efectividad del trabajo de investigación. Por ejemplo, en el experimento de la "enzima de extracción", si el valor del pH del sistema cambia significativamente, la actividad enzimática puede disminuir o incluso perderse por completo.
3. A través de sus propiedades químicas únicas, el líquido de lavado juega un papel importante en el mantenimiento de la estabilidad del pH, la protección del entorno fisiológico normal de los organismos y la mejora de los resultados experimentales. Cuando agregamos una pequeña cantidad de ácido o álcali a ciertos sistemas experimentales en trabajos de investigación bioquímica, o realizamos una dilución, si se usa un tampón, puede resistir eficazmente los cambios de pH y mantener un valor de pH estable.
Precauciones al utilizar buffers
1. Preste atención a las condiciones de almacenamiento y al período de los buffers. Por ejemplo, el tampón MOPS se puede almacenar entre 2 y 8 °C durante al menos 6 meses y se debe esterilizar mediante filtración a través de un filtro de 0,2 μm. Evite almacenar tampones en dispositivos dosificadores durante largos períodos de tiempo, ya que este equipo no es completamente hermético y puede provocar fácilmente la pérdida de componentes volátiles (como amoníaco o ácido acético).
2. Muchas soluciones tampón contienen componentes volátiles, como amoníaco en amoníaco-cloruro de amonio y ácido acético en acetato de sodio-ácido acético. Esto significa que deben formularse, sellarse y almacenarse adecuadamente en un ambiente frío inmediatamente después de su uso para evitar que los componentes se evaporen y provoquen que la solución falle. Al realizar experimentos con nucleasas, considere utilizar soluciones MOPS libres de nucleasas esterilizadas en autoclave.
3. Cuando se utiliza un tampón, es necesario seleccionar el tipo de tampón y la concentración adecuados de acuerdo con los requisitos experimentales. Por ejemplo, el tampón HEPES es un excelente tampón para la investigación biológica, con un rango de pH de 6,8 a 8,2 y se usa comúnmente en sistemas de tampón de cultivo celular.
4. El buffer debe filtrarse antes de su uso. Los disolventes y las muestras son susceptibles a las bacterias y al moho, así que preste atención a la limpieza. Generalmente, los disolventes orgánicos no se pueden utilizar directamente para la limpieza y el enjuague. Al realizar la elución en gradiente, elija un tampón con un valor de absorbancia bajo. Por ejemplo: durante la elución en gradiente, el tampón debe mezclarse previamente con la solución orgánica para evitar la precipitación de sales. Mientras se asegura de que los picos no se formen cola, utilice una sal tampón con una concentración baja tanto como sea posible para evitar la precipitación de sal.