La detección de manchas azul-blancas es un método de detección de bacterias recombinantes comúnmente utilizado en ingeniería genética.
La β-galactosidasa producida por Escherichia coli (E.Coli) de tipo salvaje puede convertir el compuesto incoloro X-gal (5-bromo-4-cloro-3-indol-β-D-galactósido) se escinde en galactosa y la sustancia azul oscuro 5-bromo-4-índigo. El 5-Bromo-4-índigo puede producir un cambio azul en toda la colonia. Después de insertar artificialmente el gen extraño, el gen extraño insertado cortó el gen de la β-galactosidasa de la E. coli mutante y no pudo formar una β-galactosidasa completa, por lo que no pudo escindir las colonias del compuesto incoloro X-gal. son blancos. La detección de manchas azul-blancas es un método de detección recombinante, que detecta recombinantes en función de las características genéticas del vector, principalmente genes alfa complementarios y antibióticos. Se analizan manchas azules y blancas en el medio indicador. Las colonias de plásmido no transformado no pueden crecer debido a la falta de resistencia a los antibióticos. Las colonias de plásmido recombinante son blancas y las colonias de plásmido no recombinante son azules. Los diferentes colores.
Algunos vectores (como los plásmidos de la serie PUC) contienen la región codificante del fragmento α N-terminal de la β-galactosidasa (lacZ). La región codificante contiene un sitio de clonación múltiple (MCS) y puede usarse. para construcción. Este vector es adecuado para células huésped mutantes que codifican únicamente el fragmento omega C-terminal de β-galactosidasa. Por tanto, aunque los fragmentos codificados por el huésped y el plásmido no tienen actividad galactosidasa, cuando existen al mismo tiempo, el fragmento α y el fragmento ω pueden formar β-galactosidasa con actividad enzimática mediante complementación α. De esta manera, el gen lacZ logra la complementación entre la célula huésped que carece del segmento proximal al operador y el plásmido que porta el segmento proximal al operador completo. Las bacterias LacZ+ generadas por complementación α producen colonias azules en presencia del sustrato cromogénico X-Gal bajo la acción del inductor IPTG (isopropiltiogalactopiranósido). Cuando se inserta ADN exógeno en el sitio de clonación múltiple del plásmido, la codificación del fragmento α se destruye casi inevitablemente, lo que hace que las bacterias LacZ con el plásmido recombinante formen colonias blancas. Este tipo de detección recombinante se denomina detección azul-blanca.