Principio de detección de manchas azules y blancas

Es un método de cribado recombinante. Algunos vectores contienen la región codificante del fragmento α N-terminal de la β-galactosidasa. La región codificante contiene múltiples sitios de clonación y se puede utilizar para construir recombinantes. Este vector es adecuado para células huésped mutantes que codifican únicamente el fragmento omega C-terminal de β-galactosidasa. Por lo tanto, ni el huésped ni los fragmentos codificados por el plásmido tienen actividad galactosidasa cuando están presentes simultáneamente.

El fragmento α y el fragmento ω pueden formar β-galactosidasa con actividad enzimática mediante complementación α. De esta manera, el gen lacZ logra la complementación entre la célula huésped que carece del segmento proximal al operador y el plásmido que porta el segmento proximal al operador completo. Cuando se inserta ADN exógeno en el sitio de clonación múltiple del plásmido, la codificación del fragmento α se destruye casi inevitablemente, lo que hace que las bacterias LacZ con el plásmido recombinante formen colonias blancas.

Información ampliada:

Principio del cribado azul-blanco

Algunos vectores (como los plásmidos de la serie PUC) transportan el α N-terminal de la β-galactosidasa (lacZ ) La región codificante del fragmento contiene un sitio de clonación múltiple (MCS) que puede usarse para construir recombinantes.

Este vector es adecuado para células huésped mutantes que codifican únicamente el fragmento ω C-terminal de la β-galactosidasa. Por tanto, aunque los fragmentos codificados por el huésped y el plásmido no tienen actividad galactosidasa, cuando existen al mismo tiempo, el fragmento α y el fragmento ω pueden formar β-galactosidasa con actividad enzimática mediante complementación α. De esta manera, el gen lacZ logra la complementación entre la célula huésped que carece del segmento proximal al operador y el plásmido que porta el segmento proximal al operador completo.

Las bacterias LacZ+ producidas por complementación α producen colonias azules en presencia del sustrato cromogénico X-Gal bajo la acción del inductor IPTG (isopropiltiogalactopiranósido). Cuando se inserta ADN exógeno en el sitio de clonación múltiple del plásmido, la codificación del fragmento α se destruye casi inevitablemente, lo que hace que las bacterias LacZ con el plásmido recombinante formen colonias blancas. Este tipo de detección recombinante se denomina detección azul-blanca.