Los métodos para preservar las cepas bacterianas incluyen la criopreservación inclinada, la cubierta de parafina líquida, la preservación con arena, la preservación con papel de filtro, la preservación con tubos de glicerina y la preservación por liofilización. 1. Método de criopreservación inclinada: inocular las bacterias en un medio inclinado sólido adecuado, envolver el tapón de algodón con papel engrasado y luego transferirlo a un refrigerador a 2-8 °C para su almacenamiento. 2. Método de conservación de la cubierta de parafina líquida: utilice parafina líquida para cubrir las bacterias de la pendiente y aislarlas del aire.
1. ¿Cuáles son los métodos de conservación de la cepa bacteriana? 1. Método de criopreservación inclinada (1) Inocular la cepa bacteriana en un medio de cultivo inclinado sólido adecuado después de que la cepa haya crecido por completo, utilice papel engrasado para tapar. con algodón parcialmente envuelto y luego transferido a un refrigerador a 2-8°C para su almacenamiento. (2) Si se trata de moho, actinomicetos y bacterias portadoras de esporas, generalmente se puede almacenar durante aproximadamente 2 a 4 meses y es necesario trasplantarlo una vez. Si se trata de levadura, generalmente se puede almacenar durante aproximadamente 2 meses y es necesario trasplantarla una vez al mes. 2. Método de conservación de la cubierta de parafina líquida (1) Coloque la parafina líquida en un matraz Erlenmeyer, tápelo con un tapón de algodón, envuélvalo con papel kraft y luego esterilícelo a 0,1 MPa y 121,3 °C durante aproximadamente 30 minutos, y luego esterilice durante unos 30 minutos se coloca en una incubadora a 40°C para evaporar el vapor de agua. (2) Cultivar las cepas que deben conservarse utilizando un medio inclinado adecuado para obtener esporas o células robustas. (3) Utilice una pajita esterilizada para aspirar la parafina líquida e inyéctela en la pendiente. La cantidad debe estar aproximadamente 1 cm por encima de la parte superior de la pendiente. (4) Coloque el tubo de ensayo en posición vertical y guárdelo a baja temperatura o temperatura ambiente. (5) Los mohos, actinomicetos y bacterias de esporas se pueden conservar durante más de 2 años, las levaduras se pueden conservar durante 1 o 2 años, las bacterias generales que no son esporas se pueden conservar durante 1 año y los meningococos se pueden conservar durante aproximadamente 3 meses. (Ambiente de 37°C hacia abajo). 3. Método de conservación de la arena (1) Prepare la arena del río, agregue 10 ácido clorhídrico diluido, luego caliente y hierva durante unos 30 minutos para eliminar la materia orgánica del interior, luego vierta el agua ácida, enjuague con el grifo hasta que el pH sea neutro. y luego hornee, seque y tamice (tamiz de malla 40) para eliminar las partículas gruesas. (2) Preparar la tierra magra de loess o roja sin humus en la capa sin cultivo, remojarla y lavarla varias veces hasta que el pH sea neutro, luego secar, triturar y tamizar (tamiz de malla 100) para eliminar las partículas gruesas. (3) Mezcle arena y tierra en una proporción de 2:1, colóquelo en un tubo de ensayo o ampolla, tápelo con un tapón de algodón y esterilícelo a 1212 °C durante aproximadamente 30 minutos. (4) Cultivar la cepa bacteriana en el medio de cultivo inclinado para obtener células bacterianas robustas, luego inyectar de 3 a 5 ml de agua esterilizada en el medio de cultivo inclinado y lavar las células o esporas para preparar una suspensión bacteriana. (5) Utilice una pajita esterilizada para absorber la suspensión bacteriana y luego colóquela uniformemente en el tubo de arena (0,2-0,5 ml/tubo). Si se trata de actinomicetos o moho, puede extraer directamente las esporas y mezclarlas en el tubo de arena. (6) Aspire el agua del tubo de arena y tierra. (7) Selle el tubo de arena y tierra con una llama, luego guárdelo en un lugar seco a baja temperatura (4-6°C), o envuelva el tubo de arena y tierra en papel kraft o papel plástico y guárdelo en un desecador. . Durante el almacenamiento, verifique la viabilidad de las bacterias aproximadamente cada 6 meses. 4. Método de conservación del papel de filtro (1) Prepare tiras de papel de filtro (0,5 × 1,2 cm) y tubos de ampolla (0,6 × 8 cm), luego coloque 1 o 2 tiras de papel de filtro en cada tubo de ampolla, tápelos con tapones de algodón y guárdelos en 0,1 MPa, esterilizado a 121 °C durante aproximadamente 30 minutos. (2) Cultivar la cepa bacteriana en un medio inclinado adecuado para obtener células bacterianas robustas. (3) Agregue 1-2 ml de leche desnatada esterilizada gota a gota en una placa de Petri esterilizada y mezcle varios anillos de césped bacteriano con la leche para hacer una suspensión concentrada. Luego use unas pinzas para retirar la tira de papel de filtro del tubo de la ampolla. en la suspensión bacteriana. Una vez llena, colóquela nuevamente en el tubo de la ampolla y tápela con un tapón de algodón. (4) Coloque el tubo de la ampolla en un desecador (que contiene pentóxido de fósforo como agente absorbente de agua) y utilice una bomba de vacío para evacuarlo hasta que esté seco. (5) Introduzca algodón en el tubo, séllelo con una llama y luego guárdelo en un ambiente de baja temperatura. 5. Método de conservación del tubo de glicerina (1) Prepare 80% de glicerol y luego realice la esterilización con vapor a alta presión.
(2) Cultivar las bacterias en un medio de cultivo inclinado adecuado e inyectar agua esterilizada para preparar una suspensión bacteriana de alta concentración. (3) Tome 1 ml de glicerina y mézclelo con el líquido bacteriano de manera uniforme, de modo que la concentración de glicerol sea aproximadamente 10-30, y luego guárdelo en un ambiente de menos 70°C. 6. El método de conservación por liofilización congela rápidamente las células a bajas temperaturas y luego las seca en condiciones de vacío para detener el crecimiento de microorganismos y las actividades enzimáticas al mismo tiempo, para garantizar que las células no se dañen durante la congelación. En el proceso de sublimación del agua se debe utilizar un agente protector. Para preparar una suspensión celular (un soluto que protege a las bacterias durante la congelación y deshidratación), se estabiliza la configuración de los componentes celulares a través de la afinidad que generan los enlaces iónicos y de hidrógeno por el agua y las células.
2. Procedimientos operativos para el subcultivo de cepas 1. Encienda la lámpara de alcohol y queme el asa de inoculación sobre la llama. 2. Sujete el medio de cepa original (tubo de cepa) y el nuevo medio de cepa (tubo de inoculación) que se van a inocular con el pulgar, el índice y el dedo medio de la mano izquierda, con el tubo de cepa al frente y el tubo de inoculación en la parte posterior. Luego sostenga el tubo de ensayo en un ángulo (45°) de modo que la pendiente interior del tubo de ensayo quede hacia arriba y las aberturas de los dos tubos de ensayo queden al mismo nivel. 3. Gire los tapones de algodón de los dos tubos junto a la llama con la mano derecha, luego sostenga el extremo del asa del asa de inoculación con la mano derecha y queme el asa de inoculación verticalmente sobre la llama. El anillo en la parte superior debe estar. al rojo vivo, y todas las partes que entran en el tubo de ensayo durante la inoculación deben quemarse. Debe quemarse con llama. 4. Utilice el dedo meñique y la palma de la mano derecha y entre el dedo anular y el meñique para sacar los dos tubos de tapones de algodón, sujételos y luego pase los tubos de ensayo sobre la llama. 5. Inserte el bucle de inoculación en el tubo de semilla bacteriana y póngase en contacto con el medio de crecimiento del césped estéril. Después de que se enfríe, recoja un poco de césped bacteriano de la superficie inclinada, luego insértelo rápidamente en el tubo de inoculación y dibuje líneas ligeramente. en la superficie inclinada para la inoculación (de abajo hacia arriba), dibuje una línea recta hacia arriba, luego una línea curva de abajo hacia arriba). 6. Una vez completada la inoculación, esterilice la boca del tubo con llama y tape el tapón de algodón.