■1. Preguntas reales del examen de ingreso a la universidad
■ 1. (Pregunta 31 del examen de ingreso a la universidad provincial de Jiangsu de 2008) (4) Durante todo el experimento, las culturas se contaron directamente de las botellas de cultivo paradas El líquido es incorrecto, la forma correcta es _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _.
(5) Después del experimento, está mal frotar la placa de recuento de células sanguíneas con un cepillo tubular humedecido en detergente. El método correcto es _ _ _ _ _ _ _ _.
■El diseño de las preguntas de análisis comienza con el método experimental del tablero de conteo de células sanguíneas, y es necesario juzgar si la operación experimental es correcta o incorrecta. La levadura en cultivo inactivo puede depositarse en la parte inferior del matraz de cultivo. Si toma la parte inferior de la solución original durante el muestreo, los datos estadísticos pueden ser demasiado grandes. Si toma la parte superior de la solución original, los datos estadísticos de la sala serán demasiado pequeños. Agite bien antes del muestreo. Cuando limpie la placa de conteo, primero sumérjala en detergente y luego enjuáguela con agua limpia. No limpie la cámara de conteo durante el proceso de lavado para evitar desgastar la rejilla de la cámara de conteo.
■Respuesta (4) Agitar bien el medio de cultivo antes de tomar la muestra.
La solución de muestra en la última etapa del cultivo se diluye y luego se cuenta (5), se remoja y se lava.
Como se puede ver en lo anterior, las preguntas del examen de ingreso a la universidad en los últimos años se han centrado en el propósito, los pasos y las precauciones del uso del tablero de conteo de células sanguíneas, y los cálculos involucrados en el proceso de conteo no se han sido cubierto. Por lo tanto, lo siguiente es un análisis y resumen de los puntos de prueba involucrados en las preguntas reales del examen de ingreso a la universidad, e introduce preguntas de cálculo específicas que no están involucradas.
■2. La estructura del tablero de conteo de células sanguíneas
El tablero de conteo de células sanguíneas es un portaobjetos de vidrio especial grueso con cuatro ranuras que forman tres plataformas. La plataforma central es muy ancha y está dividida en dos mitades por una corta ranura horizontal, con cada mitad tallada con una cuadrícula cuadrada (Fig. 1). Hay 9 grandes cuadrados grabados en la cuadrícula, de los cuales sólo el del medio es la sala de conteo (Figura 2). La longitud y el ancho de este gran cuadrado son 1 mm, la profundidad es 0,1 mm (la altura de la cámara de recuento después de haber sido cubierta por el cubreobjetos) y el volumen es 0,1 mm3. Cada cuadrado grande se divide en 25 cuadrados medianos y cada cuadrado mediano se divide en 16 cuadrados pequeños (tipo 25 × 16), como se muestra en la Figura 3.
■El ejemplo 1 es un experimento sobre "explorar los cambios dinámicos en el número de levaduras en el medio de cultivo". La afirmación correcta es ()
A. el medio de cultivo no afectará el valor k (capacidad ambiental)
Utilice el método de muestreo para investigar los cambios en la cantidad de levadura en los recipientes de vidrio.
c. Deje caer una cantidad adecuada de líquido de cultivo en un portaobjetos de vidrio común y cuente las levaduras.
D. Las condiciones nutricionales no son el único factor que afecta los cambios en la población de levaduras.
El análisis de nutrientes, el espacio, la temperatura y los excrementos tóxicos son factores limitantes que afectan el crecimiento continuo de la población. Los cambios en el valor del pH afectarán el crecimiento de la levadura. Al contar levaduras, se debe utilizar un hemocitómetro como método de muestreo. La levadura es pequeña y el recuento debe realizarse bajo un microscopio, por lo que no se puede observar directamente la cantidad de levadura en el recipiente de vidrio.
■Respuesta d
■Cuarto, principio de conteo
(1) Si hay demasiadas levaduras en un cuadrado pequeño y es difícil contar, el La solución de cultivo debe diluirse para facilitar el recuento de levaduras.
(2) La levadura viva tiene un fenómeno de gemación. Si el cuerpo en ciernes alcanza la mitad del tamaño de la célula madre, se puede contar como dos bacterias. Si el cuerpo en ciernes tiene menos de la mitad del tamaño de la célula madre, es una célula de levadura.
(3) Para la levadura prensada en el límite de la rejilla, se debe contar el número de bacterias en los lados adyacentes del mismo lado. Generalmente, se puede adoptar el principio de "contar sin contar, contar por la izquierda sin contar por la derecha", y los otros dos lados no se cuentan. Al contar, si utiliza una cámara de conteo de 16 × 25, tome el número de levaduras en las células superior izquierda, superior derecha, inferior izquierda e inferior derecha (es decir, 100 células) en diagonal (como se muestra en la parte negra en la Figura 4); si el tamaño de la placa de conteo es 25 × 16, además de sus cuatro direcciones diagonales, también es necesario contar el número de levaduras en una celda intermedia (es decir, 80 celdas pequeñas) (la parte negra en la Figura 5).
El número de células de levadura en la placa de recuento de 16×25/1 ml = el número total de células en 100 cuadrados/100× 400× 1000× factor de dilución; 16 placas de recuento/1 ml = 80 células Número total de células en un cuadrado pequeño/80× 400× 1000× factor de dilución.
■Ejemplo 2 La siguiente figura muestra las curvas de cambio de la población de levadura, la concentración de glucosa y la concentración de etanol en diferentes etapas de cultivo. Por favor responda las siguientes preguntas: Un estudiante tomó muestra en T3 y el número de levaduras contadas fue significativamente mayor que el número de levaduras correspondientes a D. Esto puede deberse a _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _Causada
■Analizar si el medio de cultivo es agitar uniformemente antes de tomar la muestra. Puede afectar los recuentos de levadura. A partir de la curva, el número de levaduras disminuye de T2 a T3, lo que indica que hay levaduras muertas en la solución de cultivo. Las levaduras muertas también se cuentan cuando se cuenta con un hemocitómetro, y el recuento de población cuenta el número de individuos vivos, por lo que la población. el número es alto. Para ello podemos utilizar métodos de tinción vivos, como el azul de metileno, que aparece azul en estado oxidado e incoloro en estado reducido, por lo que las células vivas aparecen incoloras mientras que las células muertas son azules o celestes.
■Respuesta: La solución de cultivo no se agitó uniformemente durante el muestreo y la muestra en el fondo no se tiñó. Los recuentos de bacterias incluyen bacterias muertas.
■Entrenamiento de consolidación
1. Generalmente, se utiliza un hemocitómetro para contar las levaduras en el medio de cultivo. Si la sala de recuento es un cuadrado de 1 mm × 1 mm, se compone de 400 cuadrados pequeños. Si hay demasiadas levaduras en un cuadrado pequeño, será difícil contarlas, así que diluya antes de contarlas. Si hay un promedio de 5 levaduras por cuadrado pequeño después de contar repetidamente, entonces el número total de levaduras en 10 ml de medio de cultivo es _ _ _ _ _ _ _ _ _.
2. Después de que el inspector diluya la muestra de agua de 1 ml 10 veces, detectará la cantidad de cianobacterias por ml mediante muestreo y prueba, colocará el cubreobjetos en la cámara de conteo y usará una pipeta para aspirar; Un poco de solución de cultivo se filtra sola en la cámara de recuento y el exceso de líquido se absorbe con papel de filtro. Se sabe que cada cámara de recuento consta de 25 × 16 = 400 celdas y el volumen total de líquido contenido es de 0,1 mm3.
Ahora se observa que hay n cianobacterias en las 80 células de A, B, C, D y e5 desplegadas en la cámara de conteo, por lo que hay aproximadamente _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
Respuesta 1. Dilución 2×108 2. 5n×105.