Puede replicarse y amplificarse en células huésped para secuenciación y conservación de genes extraños. Este tipo de vector tiene los componentes básicos más simples (ori, Ampr/Kanar, MCS) y no tiene elementos como promotores para iniciar la transcripción y traducción.
Además de los componentes básicos del vector de clonación, también cuenta con secuencias de ADN necesarias para iniciar la transcripción/traducción como los promotores.
Para eliminación genética específica y edición dirigida al sitio. El shRNA que contiene la secuencia de reconocimiento del gen diana o el ARNm del gen diana puede cortar el gen diana o degradar el ARNm, silenciando así la expresión génica y regulando negativamente la expresión de proteínas.
Ori es el sitio que controla el inicio de la replicación. Sólo existe un origen de replicación en una molécula de ADN procariota. Las moléculas de ADN eucariotas tienen múltiples sitios de origen de replicación. Reconocido por los factores de replicación de la célula huésped, utiliza la maquinaria de replicación del huésped para replicarse y aumentar el número de copias. Debido a las diferentes máquinas de replicación del huésped, se pueden dividir en plásmidos procarióticos/eucariotas/lanzadera.
La transformación de plásmidos es un proceso extremadamente ineficiente. En promedio, aproximadamente 1 célula de cada 10.000 células se transforma con éxito. Imaginemos que sin la presencia de genes de resistencia, el tiempo para descartar clones positivos se prolongaría considerablemente. Además, los plásmidos exógenos necesitan realizar replicación y otras actividades, que consumirán los propios recursos de la célula huésped. En el medio sin antibióticos, las células con plásmidos no dominarán y desaparecerán lentamente en presencia de antibióticos. La célula descompone el antibiótico, por lo que necesita el plásmido.
Gen de resistencia a los antibióticos: La palabra termina con R mayúscula o r en superíndice.
Ampr Ampicilina hidroliza el anillo β-lactámico y elimina la toxicidad de la ampicilina.
tetr La tetraciclina puede evitar que la tetraciclina entre en las células.
camr genera derivados de cloranfenicol hidroxiacetilo, lo que los hace no tóxicos.
neor (kanr) aminoglucósido fosfotransferasa inactiva G418 (derivado de chanamicina).
hygr higromicina, comúnmente utilizada en Agrobacterium. Inactivar higromicina β
Kan (kanamicina, de uso común), Cmr (cloranfenicol, algunos plásmidos de expresión de levadura), SM (estreptomicina),
Decidir si colocar el gen objetivo y cómo. La mayoría de los plásmidos comerciales han sido modificados artificialmente para agregar múltiples enzimas de restricción a un solo sitio de corte. Facilita la inserción de genes extraños.
Etiquetas comunes como 6×His, Myc, GST, etc.; genes indicadores de uso común como β-galactosidasa, GFP, luciferasa, etc.
Es decir, promotor (Promoter)-sitio de unión a ribosomas (RBS)-potenciador de la señal de terminación de la transcripción.
Se utiliza para distinguir los vectores de clonación de los vectores de expresión. Agregar algunos componentes del sistema de expresión al vector de clonación se convierte en un vector de expresión. ¡Es crucial para que los plásmidos funcionen!
Promotor: Es el sitio de unión de la ARN polimerasa y se sitúa aguas arriba de la caja de expresión génica. Las secuencias promotoras controlan la unión de la ARN polimerasa a los factores de transcripción y, por lo tanto, son fundamentales para determinar cuándo y dónde se transcribe el ADN. Dependiendo del tipo de ARN polimerasa del huésped, el tipo de promotor en el plásmido también varía. P: Esto generalmente representa al promotor. Los promotores comunes incluyen: CMV, EF1 (estos dos inician fragmentos largos), H1, U6 (inician fragmentos cortos, como shRNA), 35S, 2×35S (los fabricantes de plantas deberían saber esto).
Sitio de unión al ribosoma: generalmente AUG (codón de iniciación). También suele haber una secuencia SD, 5-10 pb aguas arriba del codón de inicio, que es complementaria al extremo 3' del ARNr de 16s.
TérminosSeñal de terminación de la transcripción: hay una secuencia conservada de AATAAA en el último exón del gen estructural, y hay una región rica en GT o T aguas abajo. Estas dos partes juntas constituyen la cola poli(A) Add. señal.
Los terminadores comunes en los plásmidos de expresión bacterianos incluyen T7, y los terminadores comunes en los plásmidos de células de mamíferos incluyen SV40, SV40 tardío poliA, BGH, etc. Agregar señal poli(A): puede estabilizar el ARNm. pA: este es el sitio de terminación de la transcripción poli A.
Potenciador: Es una secuencia reguladora en los genomas eucariotas (incluidos los genomas de virus eucariotas) que potencia el proceso de transcripción de genes adyacentes. Su efecto es independiente de la ubicación u orientación del potenciador.
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