La diferencia entre la electroforesis de ADN plasmídico y la electroforesis de ADN genómico:
1. Número de bandas de color de ADN: la electroforesis de ADN plasmídico tiene 3 bandas; el ADN genómico debe tener solo una banda o dos. tiras.
2. Tecnología de aplicación: la electroforesis de ADN plasmídico y la electroforesis de ADN genómico utilizan tecnología de electroforesis en gel.
La electroforesis del ADN plasmídico tendrá tres bandas, la más alejada es ADN lineal (ADNl): ambas hebras del plásmido están rotas; la del medio es ADN circular abierto (ADNoc): una hebra del; rotura del plásmido; molécula circular relajada; ***ADNcc circular cerrado: las dos hebras del plásmido no están superenrolladas; El plásmido debe salir con tres bandas, y sólo la banda más frontal es el CCCDNA.
La electroforesis de ADN genómico generalmente muestra una banda, aunque puede ocurrir fragmentación durante el proceso de extracción, formando grandes fragmentos de decenas a cientos de kb. Sin embargo, generalmente utilizamos 1 gel, que no puede distinguir el ADN de diferentes tamaños, por lo que parece una banda. Si mezcla pegamento 0.6 y agrega el marcador lamda hindIII y extiende el tiempo de aplicación del gel de manera adecuada, deberían aparecer varias bandas.
La movilidad de la electroforesis depende del tamaño y la configuración de la propia molécula de ácido nucleico. Las moléculas de ADN con menor peso molecular migran más rápido que las moléculas de ADN con mayor peso molecular. Este es el principio básico de la aplicación de la tecnología de electroforesis en gel para separar fragmentos de ADN.
Información ampliada:
Factores que afectan a la tasa de migración del ADN cuando se separa mediante tecnología de electroforesis:
1. La tasa de migración de moléculas lineales de ADN bicatenario en una determinada concentración de gel de agarosa es inversamente proporcional al logaritmo del peso molecular del ADN. Cuanto más grande es la molécula, mayor es la resistencia y más difícil es arrastrarse por los poros del gel. , por lo que la migración es más rápida.
2. Concentración de agarosa. Una molécula de ADN lineal de un tamaño determinado migra a diferentes velocidades en geles de agarosa de diferentes concentraciones. El logaritmo de la movilidad electroforética del ADN está relacionado linealmente con la concentración del gel. La elección de la concentración del gel depende del tamaño de las moléculas de ADN.
3. La conformación de las moléculas de ADN. Cuando una molécula de ADN se encuentra en diferentes conformaciones, la distancia que recorre en un campo eléctrico no sólo está relacionada con su peso molecular, sino también con su propia conformación. El ADN lineal, circular abierto y súper enrollado del mismo peso molecular se mueve a diferentes velocidades en geles de agarosa. El ADN súper enrollado se mueve más rápido, mientras que el ADN bicatenario circular abierto se mueve más lento.
4. Tensión de alimentación. A bajos voltajes, la tasa de migración de fragmentos de ADN lineales es proporcional al voltaje aplicado. Sin embargo, a medida que aumenta la intensidad del campo eléctrico, la movilidad de los fragmentos de ADN de diferentes pesos moleculares aumentará en diferentes amplitudes. Cuanto más grande sea el fragmento, mayor será el aumento de movilidad causado por el aumento de la intensidad del campo. Para separar eficazmente fragmentos de ADN de más de 2 kb, el voltaje aplicado no debe exceder los 5 V/cm.
5. La presencia de colorante intercalante. El tinte fluorescente bromuro de etidio se utiliza para detectar ADN en geles de agarosa. El tinte se intercala entre los pares de bases apiladas y alarga el ADN circular lineal y espaciado, haciéndolo más rígido y haciendo que las hebras sean más rígidas. La movilidad del ADN se reduce en un 15%. .
6. Influencia de la fuerza iónica. La composición del tampón de electroforesis y su fuerza iónica afectan la movilidad electroforética del ADN. Cuando no hay iones (como al usar por error agua destilada para preparar el gel), la conductividad es mínima y el ADN apenas se mueve. En un tampón con alta fuerza iónica (como al agregar por error un tampón de electroforesis 10X), la conductividad es muy alta y. Se produce una producción evidente. El calor puede provocar la fusión del gel o la desnaturalización del ADN en casos graves. ?
Enciclopedia Baidu - Electroforesis en gel
Enciclopedia Baidu - Plásmido
Enciclopedia Baidu - ADN genómico