Las colonias de levaduras se asignaron a nivel de especie.
Expansión y restricción de regiones del gen rRNA
(Esteve-Zarzoso et al., 1999 Introductory PCR
its 1(50-ccgtaggtgactgcgg-30). e ITS4
(50-50-tcctcgcttattgatcg-30) se utilizaron para amplificar dos regiones variables en genes 5.8 S rDNA
(White et al., 1990).
La recolección de células de agar inclinado ha tenido resultados mixtos.
70 ml de palillo y resuspender en mezcla de PCR
Incluye 50 Li ITS1, 50 Li ITS4, 0,25 Li dNTPs.
(Bioline Ltd., Londres, Reino Unido), 1X NH4
+, 2,5 y MgCl2 en
1,2u Taqpolimerasa biotaktm (Bioline Ltd., Londres,
p>
Reino Unido). Las regiones del gen rRNA se amplifican en un termociclador.
Sistema Gene Amp PCR 9700 (Perkin-Elmer,
Wellesley, MA, EE. UU.) en las siguientes condiciones:
Puntuación de 5 en 94 Desnaturalización inicial en 1°C; 35 ciclos
1 desnaturalización a 94 1°C y recocido a 55 1°C,
y extensión 2 puntos a 72 1°C y expansión final.
En 72 1 C. 10.
El producto de la PCR (12 ml) se digirió sin procesamiento adicional.
CFO I y Hae III y Hinf I se eliminaron con enzimas de restricción
III y Hinf I (Roach, Mannheim, Alemania) según la ilustración del proveedor
. Finalmente, las otras dos endonucleasas
usan Dde, déjame diferenciarlas.
Hansenula y Hansenula
Uvarum y Hpa II hacen diferente a Saccharomyces cerevisiae.
Y s paradoja.